干货分享 | ADC药物血浆稳定性研究

2023年9月25日，国家药监局药审中心发布关于《抗体偶联药物非临床研究技术指导原则》，要求在首次临床试验开展前（药物筛选和临床前研究阶段），需要获得ADC的血浆稳定性实验结果。具体来说，就是需要在临床试验开展前，需要在人和动物（药理试验和/或毒理试验动物）的血浆和/或全血等介质中考察ADC的体外稳定性。并且特别强调，ADC的内化裂解、血浆等介质中的稳定性信息对其后续药代动力学、毒理学研究的设计和实施非常重要。

一般在人和动物（药理试验和/或毒理试验动物，如猴和大鼠等）的血浆中考察ADC的血浆稳定性。ADC药物加入血浆后需要在37℃环境下孵育，以模拟生理环境。一般需要孵育4-21天，孵育过程必须在无菌环境下进行，避免染菌。样品检测后获得DAR/Free payload等随时间变化的曲线。

由于ADC在血浆孵育过程中会发生不同程度的降解，因此会产生很多种复杂的待测物。首先，需要关注的是游离小分子浓度（free drug/payload），即孵育过程中，从ADC药物上脱落的小分子毒素的浓度；其次，是药物抗体比（DAR）,即抗体上连接的小分子毒素的个数；再次，值得关注的是总抗体浓度（Total antibody），即完整抗体的降解情况（包括含小分子偶联抗体和没有偶联的抗体）；此外还需要关注ADC药物浓度（Conjugated Antibody），即检测含有小分子偶联的抗体；最后还需要关注结合型payload浓度（Antibody conjugated drug），即偶联在抗体上的小分子浓度。

采用经典的三重四极杆质谱以MRM扫描模式做定量分析，使用payload标准品做标曲，可以检测ADC药物中脱落的痕量小分子。使用的标准品是孵育过程中预期可能脱落的化合物，不是完整的linker-payload，比如Enhertu中的Dxd。

一般采用磁珠连接生物素化抗原/抗独特型抗体，亲和捕获血浆中的总抗体。对于DAR检测，将ADC从磁珠上洗下，还原后检测还原分子量，计算得到DAR值。对于总抗体检测，直接在磁珠上将ADC酶解为肽段，定量检测特征肽段。